بهینه کردن بیان و خالص سازی فاکتور ممانعت کننده از لوکمیایی نوترکیب انسانی تولید شده در باکتری اشرشیا کلای و بررسی عملکردی بودن آن از طریق تیمار سل لاین وابسته

فاکتور باز دارنده لوکمیا یی انسانی (hlif)، گلیکوپروتئینی است که از زیر خانواده ی اینترلوکین-6 (il-6) ا ست که در بسیاری از پستانداران شناسایی شده است. سایتوکاین lif دارای اثرات چندگانه تنظیمی بر روی انواع مختلف بافت ها و سلول ها ا ست. lif بقای نرون ها را تنطیم می کند و در خون سازی نقش دارد در موش هایی که lif ناک اوت شده است لانه گزینی جنینی نیز مشکل دارند کنترل پرتو ا نی سلول های بنیادی، متابولیسم استخوان و چر بی و غیره بوده و برای لانه-گزینی جنین حائز اهمیت است و در پیشبرد تولید مگاکاریوسیت ها در محیط آزمایشگا ه دخالت دارد. rhlif دارای پتان و همین طور lif به عنوان سیتوکائین پیش التهابی وتنظیم کننده ی پاسخ های ایمنی عمل می کند. علاوه بر این نقش ها lif قادر به حفظ حالت پرتوانی سلول های بنیادی جنینی است.مهمترین اهداف تحقیق حاضر بیان، بهینه کردن ، خالص سازی و بررسی فعالیت زیستی این فاکتور است. pet28 (+)وکتور حامل ژن lif و ژن مقاومت به کانامایسین به عنوان مارکر فنوتیپی می باشد که به باکتری اشرشیا کولی، سویه ی bl21 ترانسفورم شد. پس از القا با iptg با به کارگیری سه فاکتور که شامل دما، زمان القا و غلظت القاگر می شد سعی در بهینه کردن بیان پروتئین نوترکیب شد. سپس خالص سازی rhlif توسط یک مرحله کروماتوگرافی تمایلی انجام شد صحت این خالص سازی توسط sds-psge و وسترن بلاتینگ تایید گردید و همین طور فعالیت زیستی این فاکتور توسط mtt assay بررسی گردید.القا بیان rhlif توسطiptg انجام شد و بیان آن با روش sds-page تایید شد و سپس وسترن بلات? تاییدی مضاعف بر صحت rhlif بود.خالص سازی این فاکتور با کمک کروماتوگرافی تمایلی با موفقیت انجام گردید و صحت خالص سازی با sds-page و وسترن بلات تایید شد. نتایج تیمار rhlif خالص سازی شده بر روی رده ی سلولی وابسته به این فاکتور توسط mtt assay بررسی شد که موید کارکردی بودن rhlif بود.